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樣本的收集及保存操作不當(dāng)會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?

更新時(shí)間:2023-05-29    點(diǎn)擊次數(shù):3700

  樣本的收集及保存操作不當(dāng)會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果嗎?

 

  本生ELISA(酶聯(lián)免疫試驗(yàn))以其靈敏度較高、特異性好的特點(diǎn)已廣泛用于科研實(shí)驗(yàn)及臨床,越來越多科研單位選擇用ELISA實(shí)驗(yàn)方法完成研究課題。優(yōu)*的試劑、好的儀器和正確的操作是保證ELISA試劑盒檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠的必要條件,但樣本的收集及保存操作不當(dāng)也會(huì)影響ELISA實(shí)驗(yàn)結(jié)果。樣本的收集跟保存聽上去貌似很簡(jiǎn)單,但不乏有許多科研工作者因?yàn)闃颖镜氖占4鏇]做好而影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果。

  下面針對(duì)樣本收集及保存提幾點(diǎn)建議:

  1.嚴(yán)重溶血,以HRP為標(biāo)記的ELISA測(cè)定中,殘留在孔內(nèi)的血紅蛋白具有過氧化物酶樣活性,催化底物顯色造成假陽(yáng)性;

  2.混有紅細(xì)胞的血清易沉淀或附著在聚乙烯孔內(nèi)不易洗凈;如有細(xì)菌污染,菌體中可能含有內(nèi)源性HRP,也會(huì)產(chǎn)生假陽(yáng)性反應(yīng):

  3.標(biāo)本凝固不全,有時(shí)為了爭(zhēng)取時(shí)間快速檢測(cè),常在血液還未開始凝固時(shí)即強(qiáng)行離心分離血清,使血清中仍殘留部分纖維蛋白原,在ELISA測(cè)定過程中可以形成肉眼可見的纖維蛋白塊,易造成假陽(yáng)性結(jié)果;

  4.采血試管洗滌不、反復(fù)使用易交叉污染:塑料試管能吸附抗原物質(zhì),樣本久置在塑料管內(nèi)會(huì)使樣本內(nèi)抗原含量下降造成假陰性。

試劑盒1 - 副本.jpg

  血清標(biāo)本宜在新鮮時(shí)檢測(cè),嚴(yán)重溶血標(biāo)本禁用。一般說來,在5天內(nèi)測(cè)定的血清標(biāo)本可放置于4℃,標(biāo)本在冰箱中保存時(shí)間過長(zhǎng)導(dǎo)致血清IgG聚合,使間接法的試劑本底加深。超過一周測(cè)定的需-20℃保存。凍結(jié)血清融解后,蛋白質(zhì)局部濃縮,分布不均,應(yīng)充分混勻并避免產(chǎn)生氣泡?;鞚峄蛴谐恋淼难鍢?biāo)本應(yīng)先離心或過濾,澄清后再檢測(cè)。反復(fù)凍融會(huì)使抗體效價(jià)跌落,所以測(cè)抗體的血清標(biāo)本如需保存作多次檢測(cè),宜少量分裝冰存;使用一次性玻璃試管或真空管采血管;并使用非抗凝標(biāo)本,肝素抗凝血漿會(huì)增加OD值,可能與高濃度肝素具有強(qiáng)大的負(fù)電荷能吸附酶標(biāo)記物不易洗脫有關(guān);EDTA、酶抑制劑(如NaN3)可抑制ELISA系統(tǒng)中辣根過氧化物酶活性;血液標(biāo)本采集后必須使其充分凝固后再分離血清,或標(biāo)本采集時(shí)用帶分離膠的采血管或于采血管中加入適當(dāng)?shù)拇倌齽?/p>

  被檢血清或血漿標(biāo)本,可用含保護(hù)性封阻劑(吐溫-20)或稱濕潤(rùn)劑的緩沖液來稀釋。也可加入一些蛋白質(zhì),如1%牛血清白蛋白等來稀釋。然后再加到已經(jīng)用抗原或抗體包被的固相載體中進(jìn)行孵育。此種被試標(biāo)本可作一系列稀釋度測(cè)定,也可用一個(gè)稀釋度測(cè)定。對(duì)于作某一個(gè)傳染病的診斷來說,最好先用一系列稀釋度作一批標(biāo)本測(cè)定,求出對(duì)診斷有意義的一個(gè)稀釋度(即測(cè)定劑量反應(yīng)曲線),然后用一個(gè)稀釋測(cè)定即可。最適稀釋度和孵育時(shí)間均需從實(shí)踐中摸索出來,對(duì)一般病原微生物所引起的傳染病的血清學(xué)診斷,以1:200稀釋度測(cè)定比較適當(dāng),而試驗(yàn)標(biāo)本的(即含抗體)作用時(shí)間一般為室溫或37℃ 1-2小時(shí)。但現(xiàn)在對(duì)有些標(biāo)本(如流腦抗原)測(cè)定時(shí),僅用37℃ 5分鐘。對(duì)單克隆抗體檢測(cè)也可縮短作用時(shí)間。

  ELISA試劑盒 本生一直視質(zhì)量控制為企業(yè)的生命,追求企業(yè)競(jìng)爭(zhēng)力的不斷提升。公司在經(jīng)營(yíng)中始終秉承:遵紀(jì)守法,嚴(yán)于律己,寬仁以待,敢于承擔(dān)的企業(yè)精神作為標(biāo)準(zhǔn),以過硬的質(zhì)量和優(yōu)良的服務(wù)來維護(hù)和拓展市場(chǎng),較大限度的滿足客戶的需求。與客戶的共贏,是我們的發(fā)展目標(biāo)。本生!您信任的合作伙伴。我們?cè)概c您真誠(chéng)合作,共創(chuàng)美好的未來。

 

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